Regulation von Effektormolekülen durch c-kit D816V

Die systemische Mastozytose (SM) ist eine klonale neoplastische Erkrankung der Myelopoese. Das Krankheitsbild ist durch eine Akkumulation neoplastischer Mastzellen in verschiedenen viszeralen Organen sowie durch eine vermehrte Angiogenese und Fibrose im Knochenmark ausgezeichnet. In einem Großteil der SM Patienten kann die c-kit Punktmutation D8I6V nachgewiesen werden. Dies Mutation führt zur konstitutiven Aktivierung des c-kit Rezeptors und bewirkt eine wachstumsfaktorunabhängige Proliferation und Differenzierung der Mastzellen. Allerdings ist bisher sehr wenig über c-kit D816V-regulierte Gene und entsprechende Signaltransduktionswege bekannt. Im speziellen ist nicht bekannt, welche c-kit D816V-abhängigen Mechanismen zum gesteigerten Überleben der neoplastischen Mastzellen, zu ihrer pathologischen Akkumulation in viszeralen Organen und zu den typischen Knochenmarksveränderungen (vermehrte Angiogenese und Fibrose) im Rahmen der SM führen. In den letzten Jahren konnte gezeigt werden, daß neoplastische Mastzellen in Patienten mit SM eine Reihe von antiapoptotischen Molekülen (bcl-2, bcl-xL) und Adhäsionsantigenen (CD2) sowie angiogenetische Faktoren (VEGF) expremieren. Unklar ist allerdings, welche Rolle c-kit D816V in der Regulation dieser pathogenetisch interessanten Gene spielt. Das Ziel dieser Studie ist es, die Bedeutung des mutierten c-kit Rezeptors für die aberrante Expression von antiapoptotischen, adhäsions-assoziierten sowie angiogenetischen Molekülen in neoplastischen Mastzellen zu untersuchen, zugrunde-liegende Signaltransduktionswege zu charakterisieren, und schließlich die Expression c-kit D816V-abhängiger Gene, die zu Pathogenese der SM beitragen könnten, gezielt zu unterdrücken. Zu diesem Zweck wurde ein Zellinienmodell mit induzierbarer c-kit Expression (Ba/F3 Zellen mit doxyzyklin-induzierbarer Expression von Wild-Typ c-kit und c-kit D816V) in unserem Labor etabliert. Mit Hilfe dieses Zellinienmodells soll die c-kit D816Vabhängige Genexpression auf der Promotor-, mRNA- und Protein-Ebene untersucht werden. Signaltransduktionswege, die der c-kit D816V-abhängigen Genexpression zugrundeliegen, sollen mit Hilfe von spezifischen pharmakologischen Inhibitoren sowie durch Expression von mutierten (dominant negativen oder konstitutiv aktiven) Signaltransduktionsmolekülen (Ras, P13-kinase, Akt, STAT5) charakterisiert werden. Die im Ba/F3-Zellsystem erhobenen Daten sollen dann in einem weiteren Schritt für humane Mastzellen (HMC-1 Zellinie, primäre neoplastische Mastzellen in SM Patienten) bestätigt werden. Die Rolle der c-kit D816V-abhängiger Moleküle für das Überleben und die Adhäsion der Mastzellen soll sowohl in in vitro Experimenten als auch in vivo in einem XenotransplantationNOD/SCID-Mausmodell evaluiert werden.