Molekulare Analyse der TRPV6 Protein Funktion

Die Gruppe der TRP Proteine ist eine neu entdeckte Familie von Kationen-Ionenkanälen, wobei einige dieser Kanäle durch intrazelluläre Speicherentleerung aktiviert werden. Das TRPV6 Protein, ein sehr Calcium selektiver Ionenkanal wurde in verschiedenen sekretorischen Zellen nachgewiesen. Das vorliegende Projekt untersucht auf molekularer Ebene die Funktion des Calciumsstroms des TRPV6 Proteins in Mastzellen und Prostata Krebszellen mit Hilfe verschiedener komplementärer Techniken, die von Elektrophysiologie und Fluoreszenz Mikroskopie über Molekularbiologie bis hin zu biochemischen in vitro Studien reichen. Knock-out Techniken wie Antisense und RNAi gegen TRPV6 oder dominant negativ wirkende TRPV6 Mutanten sollen Aufschluss über die Rolle von TRPV6 zum speicheraktivierten Calciumeinstrom in diesen Zellen geben. Speziell der Amino-terminus von TRPV6 wirkt dominant negativ, deshalb wird sein Einfluss auf die Bildung oder Funktion des Calciumkanal untersucht. Der Grund für den negativen Effekt könnte in der intermolekulare Interaktion, die zur TRPV6 Multimerisierung führt, liegen, verschiedene Fragmente und Mutanten des N-terminus werden hierzu Aufschluss geben. Weitere Einblicke in die Regulation des TRPV6 wird durch die Interaktion mit dem IP 3 Rezeptor, der Phospholipase C und dem Protein NHERF erwartet. Die Aktivierung des TRPV6 Kanals wird durch den Blocker 2-APB verhindert, deshalb soll ein Derivat von 2-APB zur Intentifizierung dieses Proteins führen. Das hier hinzugewonnene Wissen über die Regulation des TRPV6 Kanals wird zum molekularen Verständnis des Calciumstroms in Mastzellen und Prostata Krebszellen führen und die Möglichkeit therapeutischer Manipulation steigern.