Identifikation von Zellzyklusregulatoren

Zellen müssen ihre Bestandteile verdoppeln und gleichmäßig auf Tochterzellen verteilen, um eine gleichmäßige Zellteilung zu gewährleisten. Besonders wichtig ist dies für die Verdopplung und Aufteilung der genetischen Information (DNA) der Zelle und Fehler in der Aufteilung der Chromosomen während der Mitose können zur Krebsentstehung beitragen. Der Wechsel zwischen DNA Synthese und Aufteilung als individuelle Chromosomen während der Mitose wird durch Cyclin-abhängige Kinasen reguliert. Wie jedoch diese Kinasen die einzelnen Vorgänge während der Zellteilung regulieren ist in vielen Details noch nicht verstanden. Um die Vorgänge während der Zellteilung besser zu verstehen, auch um damit Einblicke in das Krebsgeschehen zu gewinnen, wollen wir in diesem Projekt versuchen Substrate dieser Kinasen zu identifizieren. Dazu verwenden wir ein Expressionsklonierungsverfahren, wobei in vitro translatierte Proteine phosphoryliert werden und rasch identifiziert werden können. Dieses Verfahren wird ergänzt durch ein Klonierungsverfahren, bei dem Proteine identifiziert werden, die mit der aktivierenden Untereinheit der CDKs interagieren können. Weiter wollen wir eine Anzahl von Proteinen, die mit dem grün fluoreszierenden Protein in Zellen sichtbar gemacht werden, hinsichtlich ihres Verhaltens während der Zellteilung untersuchen. Diese, in diesen drei Suchansätzen identifizierten, Gene sollen dann funktionell auf ihre Bedeutung während der Zellteilung untersucht werden. Dazu werden sie durch RNA Interferenz, einer neuen Methode zur spezifischen Inaktivierung von Genen in humanen Zellen, ausgeschalten und die Zellen mittels Zeitraffermikroskopie beobachtet. Dadurch können neue Gene identifiziert werden, die für die Zellteilung eine wichtige Rolle spielen und möglicherweise in Tumorzellen dereguliert sind.

Zellen müssen ihre Bestandteile verdoppeln und gleichmäßig auf Tochterzellen verteilen, um eine gleichmäßige Zellteilung zu gewährleisten. Besonders wichtig ist dies für die Verdopplung und Aufteilung der genetischen Information (DNA) der Zelle und Fehler in der Aufteilung der Chromosomen während der Mitose können zur Krebsentstehung beitragen. Der Wechsel zwischen DNA Synthese und Aufteilung als individuelle Chromosomen während der Mitose wird durch Cyclin-abhängige Kinasen reguliert. Wie jedoch diese Kinasen die einzelnen Vorgänge während der Zellteilung regulieren ist in vielen Details noch nicht verstanden. Um die Vorgänge während der Zellteilung besser zu verstehen, auch um damit Einblicke in das Krebsgeschehen zu gewinnen, wollen wir in diesem Projekt versuchen Substrate dieser Kinasen zu identifizieren. Dazu verwenden wir ein Expressionsklonierungsverfahren, wobei in vitro translatierte Proteine phosphoryliert werden und rasch identifiziert werden können. Dieses Verfahren wird ergänzt durch ein Klonierungsverfahren, bei dem Proteine identifiziert werden, die mit der aktivierenden Untereinheit der CDKs interagieren können. Weiter wollen wir eine Anzahl von Proteinen, die mit dem grün fluoreszierenden Protein in Zellen sichtbar gemacht werden, hinsichtlich ihres Verhaltens während der Zellteilung untersuchen. Diese, in diesen drei Suchansätzen identifizierten, Gene sollen dann funktionell auf ihre Bedeutung während der Zellteilung untersucht werden. Dazu werden sie durch RNA Interferenz, einer neuen Methode zur spezifischen Inaktivierung von Genen in humanen Zellen, ausgeschalten und die Zellen mittels Zeitraffermikroskopie beobachtet. Dadurch können neue Gene identifiziert werden, die für die Zellteilung eine wichtige Rolle spielen und möglicherweise in Tumorzellen dereguliert sind.