Isolierung von hochproduzierenden tierischen Zellinien

Die Etablierung von Zellinien, die humane Antikörper für die Therapie von Krebs oder von viralen und bakteriellen Infektionen erzeugen, ist eine sehr Zeit- und Arbeits- und kostenintensive Technologie. Dieses Projekt soll eine neue Technologie evaluieren, die den benötigten Aufwand um einen Faktor von mindestens 10 reduzieren soll. Die direkte Messung der spezifischen Produktionsrate einzelner, lebender Zellen soll ihre Isolierung durch ein Durchflußzytometer mit Zellsorter ermöglichen. Als Modell wurde eine rekombinante Chinese Hamster Ovary Zellinie gewählt, die humane Antikörper produziert. Diese Zellinie wurde bereits nach traditionellen Methoden gescreent und amplifiziert und produziert 10-20 pg Antikörper pro Zelle und Tag bei einer Methotrexat-Konzentration von 9.6m M. Mit Hilfe der neuen Technologie soll ein früher Subklon dieser Linie erneut gescreent und amplifiziert werden, so daß der dabei anfallende Aufwand mit der traditionellen Methode verglichen werden kann. Zusätzlich zur spezifischen Produktionsrate sollen andere Zelleigenschaften, die für eine Produktionslinie wünschenswert erscheinen, in den Selektionsprozeß eingebaut werden. Für diese Studie wurden die Stabilität der Genexpression und eine Veränderung der Produktionskinetik als Modell ausgewählt. Die Methode kann auch als sehr potentes analytisches Instrument zur Erforschung der Zellphysiologie eingesetzt werden. Da die spezifische Produktionsrate einzelner, lebender Zellen gemessen werden kann, kann man diesen Parameter mit anderen Zelleigenschaften, wie Zellzyklusphase, intrazelluläre Produktkonzentration u.a. in Korrelation setzen. Dies sollte interessante Informationen über die Kinetik und Physiologie der Produktbildung in tierischen Zellen geben. Während des dritten Jahres soll die Methode so modifiziert werden, daß sie auch für humane Hybridomas einsetzbar ist. Diese Veränderungen sollen auch dazu eingesetzt werden, durch Färbung mit den spezifischen Antigen gleich bei der ersten Zellisolierung solche Hybridomazellen heraus zu sortieren, die Antigen-spezifische Antikörper bilden. Das sollte die Anzahl der notwendigen Tests (z.B. auf Spezifität) noch einmal reduzieren und so die Effizienz der Zellinienselektion erhöhen.