Eine neue Isomerase aus Froschhaut

Im Hautsekret verschiedener Frösche wurden Peptide gefunden, die eine D-Aminosäure in zweiter Position enthalten. Diese Peptide werden aus größeren Vorstufen freigesetzt, die nur aus L-Aminosäuren bestehen. Wir haben nach einem Enzym gesucht, das in Peptiden die Bildung von D-Aminosäuren aus den entsprechenden L- Isomeren katalysiert. Aus dem Hautsekret zweier heimischer Bombina-Arten konnte ein Enzym isoliert werden, das in einem Modellpeptid die Umwandlung von L-Isoleucin zu D-allo-Isoleucin katalysiert. Dieses Enzym, das als eine Peptidyl-Aminoacyl-L-D-Isomerase bezeichnet werden könnte, ist weitgehend gereinigt worden. Wir hoffen, daß es bald gelingen wird, Teile der Aminosäuresequenz dieser Isomerase zu bestimmen. Mit diesen Daten soll dann versucht werden, aus der mRNA der Haut dieser Frösche die für dieses Enzym kodierende cDNA zu klonieren. Diese wird sodann mit rekombinanten Vaccinia Viren exprimiert werden. Es ist weiters geplant, diese neuartige enzymatische Reaktion hinsichtlich Substratspezifität, Mechanismus der Katalyse usw. genauer zu studieren. Wir werden dann auch versuchen, mit gentechnischen Methoden verwandte Enzyme in der Haut anderer Amphibien in anderen Geweben von Fröschen, und möglicherweise in Säugern zu finden. Bei der Auftrennung des Hautsekrets haben wir in Nebenfraktionen ein kleines Protein gefunden, das wir vorläufig Bv8 nennen. Die Sequenz dieses aus 77 Aminosäuren bestehende Bv8 zeigt Ähnlichkeit mit jener des Proteins A aus dem Gift der Schwarzen Mamba. Ein EST aus embryonalen Stammzellen der Maus wurde in den Datenbanken deponiert, das möglicherweise für ein Fragment eines ähnlichen Proteins kodiert. Wir möchten im Rahmen eines Teilprojekts die cDNAs isolieren und exprimieren, die für Bv8 und das potentielle Maus-Homologe kodieren. Auch in diesem. Fall soll geprüft werden, ob Proteine dieser Art in verschiedenen Spezies und Geweben nachgewiesen werden können. Aus den erwähnten Fraktionen des Hautsekrets werden wir zudem einige Milligramm von Bv8 isolieren, die für pharmakologische in vitro und in vivo Experimente verwendet werden sollen, um nach Hinweisen für dessen biologische Funktion zu suchen.