Diazaboriwirkung in Hefe

Im gegenständlichen Projekt wurden die Gründe für die Resistenzentstehung in der Hefe Saccharomyces cerevisiae gegen den Wirkstoff Diazaborin untersucht. Das Projekt beschränkte sich auf jene Resistenzmechanismen, denen Detoxifizierungsvorgänge zugrunde liegen. Es konnten zwei grundlegende genetische Netzwerke identifiziert werden, die bei dieser Resistenzentstehung aktiviert werden. Eines davon beruht auf dem Transcriptionsfaktor Yap1 der Hefe, dessen grundsätzliche Bedeutung in der Stressabwehr bekannt ist, und von dem wir ein mutiertes Allel (gain of function allele) isolieren konnten, welches Resistenz vermittelt. Im Verlaufe der Projektarbeit konnten zwei membranständige Effluxpumpen identifiziert werden, die vom Yap1-Allel aktiviert werden und die Teil des Netzwerkes sind. Es handelt sich um das Protein Flr1 der Cytoplasmamembran und das Protein Ycf1 der Vakuolenmembran. Das zweite der Resistenzentstehung dienende Netzwerk beruht auf den Transcriptionsaktivatoren Pdr1 und Pdr3, von denen wir ebenfalls in einem früheren FWF-Projekt "gain of function"-Allele identifizieren konnten. Diese Allele aktivieren in hohem Maße Effluxpumpen. Wir konnten im gegenständlichen Projekt zwei in der cytoplasmatischen Membran lokalisierte Pumpen, nämlich die Proteine Pdr5 und Snq2 als Teile des Netzwerkes, die zur Diazaborinresistenz führen, identifizieren. Wir konnten kürzlich auch in noch nicht publizierten Experimenten zeigen, dass sich die beiden Netzwerte genetisch beeinflussen, indem Pdr1-12 die Expression von Yap1p stimuliert. Diese Beobachtung ist absolut neuartig und wird ein wichtiger Faktor für das Verständnis der Stressantwort in Hefe sein.