Einfluss von Yap1p auf die Regulation von Cdc48p

Apoptose, eine durch definierte morphologische Marker charakterisierte Form des physiologischen Zelltods, ist im Leben vielzelliger Organismen von zentraler Bedeutung. Eine Missregulation von apoptotischen Prozessen kann zu schwerwiegenden Krankheiten, wie zum Beispiel viralen Infektionen, Krebs- oder Autoimmunerkrankungen, führen. Mit Cdc48p, einem Mitglied der AAA-Familie von Proteinen (ATPases associated with a variety of cellular activities) in der Hefe Saccharomyces cerevisiae, konnte erstmals ein Protein identifiziert werden, das in einem einzelligen Organismus für Apoptose verantwortlich ist. Die durch Wasserstoffperoxid stimulierte Expression von Cdc48p ist abhängig vom Transkriptionsfaktor Yap1p, einem Protein das eine zentrale Rolle in der oxidativen Stressantwort spielt. Dies ist vor allem deshalb von großem Interesse, da gezeigt werden konnte, dass oxidativer Stress nicht nur Schäden an der DNA, an der Zellmembran, oder an Zellproteinen hervorrufen kann, sondern auch zu Apoptose führt. Ziel dieses Projektes ist es, den Einfluss von Yap1p in die Regulation von Cdc48p und in apoptotische Prozesse in der Bäckerhefe Saccharomyces cerevisiae zu untersuchen. Aus diesem Grund möchte ich mit Hilfe von mutierten CDC48- und YAP1-Allelen nicht nur Einblick in die Yap1p-vermittelte Expression von Cdc48p erhalten, sondern auch mutierte Stämme auf das charakteristische Auftreten von apoptotischen Markern, wie Kondensation von Chromatin, Fragmentierung von DNA oder Exponierung von Phosphatidylserin, untersuchen. Die dabei verwendeten Methoden erstrecken sich von Northern Blot Analysen über DNA-Chip Technologie, bis hin zu Fluoreszenz- und Elektronenmikroskopie. Diese Untersuchungen werden in der Hefe Saccharomyces cerevisiae durchgeführt, die als einfacher Eukaryont zu einem wichtigen Modellsystem für physiologische und pathologische Vorgänge beim Menschen geworden ist.